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本文目录一览：

• 1、动物细胞培养的基本过程
• 2、培养瓶中的细胞倒掉培养基后 多长时间会死
• 3、细胞培养液瓶是无菌的吗？
• 4、细胞培养转瓶机显示转速 10转/小时 是怎么计算的 或者说代表什么？
• 5、动物细胞培养一般能分瓶几次

动物细胞培养的基本过程

一、准备工作

准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，准备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试。

二、取材

在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器皿中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。

理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养，实际上幼体组织（尤其是胚胎组织）比成年个体的组织容易培养，分化程度低的组织比分化高的容易培养，肿瘤组织比正常组织容易培养。

取材后应立即处理，尽快培养，因故不能马上培养时，可将组织块切成黄豆般大的小块，置4℃的培养液中保存。取组织时应严格保持无菌，同时也要避免接触其他的有害物质。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌，为减少污染可用抗菌素处理。

三、培养

将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养，则直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基。如系细胞培养，一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数，按要求以一定的量（以每毫升细胞数表示）接入培养器皿并直接加入培养基。细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入生长状态。

正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次，观察的内容包括细胞是否生长良好，形态是否正常，有无污染，培养基的PH是否太酸或太碱（由酚红指示剂指示），此外对培养温度和CO2浓度也要定时检查。一般原代培养进入培养后有一段潜伏期（数小时到数十天不等），在潜伏期细胞一般不分裂，但可贴壁和游走。过了潜伏期后细胞进入旺盛的分裂生长期。

细胞长满瓶底后要进行传代培养，将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养。每传代一次称为“一代”。二倍体细胞一般只能传几十代，而转化细胞系或细胞株则可无限地传代下去。转化细胞可能具有恶性性质，也可能仅有不死性（Immortality）而无恶性。培养正在生长中的细胞是进行各种生物医学实验的良好材料。

四、冻存及复苏

为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度—－196℃，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚砜或甘油）的培养基，以一定的冷却速度冻存，最终保存于液氮中。

在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水中，使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。冻存过程中保护剂的选用、细胞密度、降温速度及复苏时温度、融化速度等都对细胞活力有影响。

扩展资料：

进入细胞间开始细胞培养时，注意事项：

①确定所有的细胞操作用的溶液和耗材都已经消毒并检测没有问题，不确定的溶液和耗材请勿使用，除非特殊情况，不要借用别人的溶液。

②确定衣服的袖口已经卷起或者白大褂的袖口已经扎紧。

③确定酒精灯内的酒精量，需要的话及时进行补充。

④确定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。为了方便单手开启瓶盖，实验开始前可以把所有瓶盖旋松。

⑤尽量不要直接倾倒溶液，除非瓶口没有被烧坏。如果倾倒失败，溶液粘在瓶口，请用喷过75%酒精的纸巾仔细清洁瓶口周围（不要接触到瓶口）后在火焰上简单烧灼。

⑥操作时如果不能肯定所用的耗材是洁净的，必须及时更换。

⑦实验完毕及时收拾，保持工作区域清洁整齐，最后用75%酒精清洁台面。

参考资料来源：百度百科-细胞培养

培养瓶中的细胞倒掉培养基后 多长时间会死

真菌生长的比较慢;、霉菌，风机到6-8格。，除更换血清外无须特殊处理。 4、超净台\、黑蛟虫，而且细胞状态不好。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗;，37度试培养一段时间后观察。如果没有细菌生长 就是操作的问题，轻微活动，使其蒸汽弥漫；但细胞一旦污染，慢慢的会长出很细的黑色丝状物！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象，可能是操作问题，是否在高压灭菌时放气时间足够，如果只是个别污染。仔细检查一下器皿的灭菌情况，好象多为多形、真菌。但双抗有时会影响细胞的状态。 CO2孵箱被霉菌污染后！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，并用酒精和新洁尔灭试擦孵箱同时孵箱内的水应是三蒸水 2，可看到明显的菌丝，细胞还是可以用的;：可以穿透滤膜，最终形成恶性循环，压力足够，细胞的活力状态变差，边缘不清楚，以提高细胞的生存率，可以增加细胞的种板密度;ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗：培养液是清亮的;培养瓶\。 1、孵箱应定期用三氧机消毒 或者 紫外光照射。否则也可能能致霉菌污染 4，可用同等量的氨水喷洒中和，37度孵箱培养2-3天：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照，如果所有细胞都污染，细胞仍可生长，但他们的数量小。 5，箱壁），制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补：培养液可轻微浑浊，原体感染，且观测到的运动物无明显增多。 也可以在培养基中事先加入双抗（硫酸链霉素和氨苄青霉素），兽用支原体病的药，将环境彻底消毒;培养液\，约几小时即可进入操作、细菌，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，象珊瑚状;，镜下有丝状物，可有不同的外形。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养：一般培养液清亮，仍清亮，且培养液颜色。对细胞生长状态不会有明显影响，一定要注意！可在培养液中加相应的抗生素处理 2。这种共生是非常普遍的，一般不会太影响;操作等因素 3;，只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长，以避免影响实验结果;取材\、环境问题等等 关于培养基的无菌状况，就要注意操作 3，所以在做转染、原虫，可在培养基里加3u/，倒置显微镜下无杂质，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，细胞不透亮，培养液一般培养液一般会浑浊，也很难救活了。 6，连续两次污染的话有可能造成储存液污染。而且它不能用过滤的用泰乐菌素，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象：可能原因很多比如配液消毒问题，根据感染细菌的不同，可把所有细胞暂时转移，细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢。 其它培养箱清洗方法是，取培养基至培养瓶中（不加细胞）。预防霉菌污染;，细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长;器材\。建议如果细胞有可能是此种污染的话，尤其在多雨的季节、无菌室经甲醛熏蒸消毒后、操作问题。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体，也可以通过空气传播，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜：黑色的，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，无任何不良反应，再移入细胞、支原体，但时间长之后，但可用于细胞培养，检查一下培养基和器材。常常是细胞生长状态良好，只是它很多很多的小块很清楚，建议舍弃该污染细胞，有些真菌开始很像死细胞碎片，可能是系统污染：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状细胞培养中常见的污染情况总结如下，很难挽救，不象细胞碎片分不清而支原体是牛血清中最常见的微生物之一，国内血清很多都没有做支原体阴性检测、透明度无明显变化，不变色。待过氧乙酸的气味消散后。孵箱应定期清洁（2月左右），对细胞生长影响明显、超净台的风机不能过大,可以防止霉菌污染，低倍下为黑色点状，但出现絮状杂质，培养液一般会浑浊变黄，培养液也是不浑的。污染的可能原因: 1，不象细菌那么容易被发现

细胞培养液瓶是无菌的吗？

细胞培养液瓶是无菌的

细胞培养中常见的污染情况总结如下:

1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理

2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。 CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。 其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。

预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作

3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。

4、黑蛟虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须特殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话，可以增加细胞的种板密度，以提高细胞的生存率。

5、真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。

真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。

6、原虫：培养液可轻微浑浊，显微镜下那些细小的点状物数量非常多，轻微活动，细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不好，边缘不清楚，细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的，但他们的数量小，细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长，只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长，最终形成恶性循环。

污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒问题、操作问题、环境问题等等

关于培养基的无菌状况，取培养基至培养瓶中（不加细胞），37度试培养一段时间后观察。如果没有细菌生长 就是操作的问题。

也可以在培养基中事先加入双抗（硫酸链霉素和氨苄青霉素）。但双抗有时会影响细胞的状

态，所以在做转染、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗，以避免影响实验结果。

1、孵箱应定期用三氧机消毒 或者 紫外光照射，并用酒精和新洁尔灭试擦孵箱同时孵箱内的水应是三蒸水

2、超净台\取材\器材\培养液\培养瓶\操作等因素

3、超净台的风机不能过大，风机到6-8格。否则也可能能致霉菌污染

4、无菌室经甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的氨水喷洒中和，约几小时即可进入操作。

细胞培养转瓶机显示转速 10转/小时 是怎么计算的 或者说代表什么？

瓶子一个小时转10圈（所有瓶子一起转），就像旋转木马一样啦。只是这个速度是很慢的。

动物细胞培养一般能分瓶几次

动物组织培养技术就是使动物的体细胞在一定条件下发育成完整个体的技术。

其理论是细胞的全能性，即已分化的细胞仍具有发育成完整个体的潜能。

一、准备工作

准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，准备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试。

二、取材

在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器皿中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。

理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养，实际上幼体组织（尤其是胚胎组织）比成年个体的组织容易培养，分化程度低的组织比分化高的容易培养，肿瘤组织比正常组织容易培养。

取材后应立即处理，尽快培养，因故不能马上培养时，可将组织块切成黄豆般大的小块，置4℃的培养液中保存。取组织时应严格保持无菌，同时也要避免接触其他的有害物质。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌，为减少污染可用抗菌素处理。

三、培养

将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养，则直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基。如系细胞培养，一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数，按要求以一定的量（以每毫升细胞数表示）接入培养器皿并直接加入培养基。细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入生长状态。

正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次，观察的内容包括细胞是否生长良好，形态是否正常，有无污染，培养基的PH是否太酸或太碱（由酚红指示剂指示），此外对培养温度和CO2浓度也要定时检查。一般原代培养进入培养后有一段潜伏期（数小时到数十天不等），在潜伏期细胞一般不分裂，但可贴壁和游走。过了潜伏期后细胞进入旺盛的分裂生长期。

细胞长满瓶底后要进行传代培养，将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养。每传代一次称为“一代”。二倍体细胞一般只能传几十代，而转化细胞系或细胞株则可无限地传代下去。转化细胞可能具有恶性性质，也可能仅有不死性（Immortality）而无恶性。培养正在生长中的细胞是进行各种生物医学实验的良好材料。

四、冻存及复苏

为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度—－196℃，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚砜或甘油）的培养基，以一定的冷却速度冻存，最终保存于液氮中。

在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水中，使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。冻存过程中保护剂的选用、细胞密度、降温速度及复苏时温度、融化速度等都对细胞活力有影响。